滤膜法是采用真空泵负压抽滤原理,在滤杯内的微孔滤膜(使用前灭菌)上下面产生一个压差,滤杯内的受试品由于压差作用通过微孔滤膜。微孔滤膜具有复杂的蜂孔结构,即使0.45μm以下的微生物亦可被拦截,从而高效地回收微生物,将受试品中可能存在的微生物截留在滤膜上。
1. 滤膜法所需仪器
包括细菌过滤器或微生物限度检测仪(配有滤器)和0.45μm滤膜。
1)细菌过滤器:由真空泵系统、收集瓶、连接管、过滤架、过滤杯、火焰灭菌器等组成。
2)微生物限度检测仪:由过滤排液箱体、火焰灭菌器、过滤杯共同组成。
3)过滤杯(滤器):市售有不锈钢材质和改性PP材质的滤杯,均可采用湿热灭菌和火焰枪快速灭菌。
2. 具体操作
1)取出灭菌好的滤杯与主机相连,确保密封完好;
2)将采用直接接种法后的剩余洗脱液注入滤杯内,通过真空泵负压抽滤,滤杯内的洗脱液由于压差作用通过微孔滤膜(使用前灭菌),将洗脱液中可能存在的微生物截留在滤膜上;
3)取下滤杯,用无菌镊夹取滤膜,转移至配置好的固体培养基上,菌面朝上,平贴,滤膜应与培养基完全贴合,不得有气泡(气泡处会影响微生物的生长);
4)盖上培养皿盖子,将培养皿置于36℃±1℃恒温培养箱内培养48h并计数;
5)操作结束后,切断电源。
Q7:洗脱液如何配置?什么是中和剂?中和剂怎么选择?
根据GB15982-2012《医院消毒卫生标准》附录B 试剂和培养基
1. 洗脱液是由10.0g蛋白胨、8.5g氯化钠、1.0mL土温80、1000mL0.003mol/L磷酸盐缓冲液加热溶解后调PH至7.2~7.4,于121摄氏度压力蒸汽灭菌20min后制成。
2. 中和剂是指在微生物杀灭试验中,用以消除试验微生物与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂,使其失去对微生物抑制和灭杀作用的试剂。
在医院环境卫生学监测及消毒效果监测采样时,应根据使用的消毒剂类型选择合适的中和剂。医院常用消毒剂的中和剂见下表。
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